Cell3iMagerシリーズ - アプリケーション

ラベルフリーイメージングシステム

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NK細胞のKilling Assay
3D培養（ゲル培養）オルガノイドのフォーカス合成
iPS細胞樹立工程での活用
多孔ウェルプレートの観察と細胞塊の定量

NK細胞のKilling Assay

CellTrace Far Redで染色したNK細胞とCellTrace Violetで染色したMCF7細胞を共培養し，Killing Assayを実施しました。Cell3iMager duos/duos2およびDeep Learningプラグインを使用した明視野解析により，NK細胞存在下では割合に応じたMCF7の増殖の抑制が確認出来ました。

3D培養（ゲル培養）オルガノイドのフォーカス合成

Zスタッキングスキャニングにより，オルガノイドのフォーカス合成を行いました。
マトリゲルドーム中で，腸管オルガノイドの3D培養を行い，培養6日目にduos2にてZスタッキングスキャニングを実施しました。50 μmピッチで画像を取得し，フォーカス合成を行うことで，マトリゲルドーム中のオルガノイドを網羅的に撮像することができました。

3D培養（ゲル培養）オルガノイドのフォーカス合成

iPS細胞樹立工程での活用

iPS細胞を樹立するためには，体細胞を採取し初期化因子を導入したあと，コロニーを選別し，選別後もiPS細胞としての特長を保有してるか評価する必要があります。
コロニー形成後は，多数のコロニーを観察・評価する必要があるため労力がかかります。そこで，高速スキャンにより各工程での細胞観察の省力化が可能なCell3iMager duosおよびCell3iMager duos2を活用した例をご紹介します。

樹立工程のフロー

コロニー形成での活用

体細胞に初期化因子を導入して初期化を行います。
線維芽細胞に初期化因子を導入し28日間培養し，Cell3iMager duosでWell全面を撮像しました。
Well全面を撮像することで，全てのコロニー形態を記録することができ，初期化効率の算出など，樹立作業の振り返りに利用できます。

コロニー形成での活用

未分化性評価での活用

樹立したiPS細胞の未分化性を免疫染色法によって評価します。
5日間培養したiPS細胞をパラホルムアルデヒドで固定し，Oct3/4（未分化マーカー）とHoechst33342（核）で染色しました（未分化細胞では緑色と青色の蛍光を示し，逸脱した細胞は青色のみの蛍光を示します）。
Cell3iMager duos2でWell全面撮像しました。
Well全体の逸脱細胞の割合を算出することで，逸脱細胞が少ない細胞株を選別することが可能です。また明視野画像と蛍光画像を1度に撮像することができます。

未分化性評価での活用

多能性評価での活用

iPS細胞の多能性を評価するために三胚葉への分化能を評価します。
胚様体をプレートに接着させ分化培地で14日間培養し三胚葉へ分化させました。分化した細胞を免疫染色した後，Cell3iMager duos2で撮像し，各胚葉マーカー（外胚葉・中胚葉・内胚葉）の発現を蛍光検出にて確認しました。
Cell3iMager duos2では3色の多重染色画像を１度に撮像することができます。

外胚葉 (TUJ1)

青：Hoechst33342
緑：TUJ1

中胚葉 (αSMA)

青：Hoechst33342
緑：αSMA

内胚葉 (SOX17)

青：Hoechst33342
緑：SOX17

TUJ1およびαSMA

青：Hoechst33342
緑：αSMA
赤：TUJ1

多孔ウェルプレートの観察と細胞塊の定量

多孔ウェルプレートを撮像し，細胞塊を抽出して細胞塊の数や直径等を定量しました。Deep Learningにより，微細ウェルを誤認することなく細胞塊のみを抽出できました。