Ampdirect® 技術とリアルタイム PCR 装置による簡便・迅速なジェノタイピング法

はじめに

近年，ライフサイエンス分野の研究における遺伝子改変マウスの利用は，急激に増加し，もはや特別な手法ではなく，むしろ誰でも容易に入手し，取り扱える必須のツールの一つとなってきています。 実験に遺伝子改変マウスを使用する場合は，それを繁殖する必要がありますが，ほとんどの場合は，その際，ジェノタイピングと呼ばれる方法により，遺伝子改変マウスの型（遺伝子型）を判別しています。例えば，ノックアウトマウスであれば，ホモノックアウトマウス，ヘテロノックアウトマウス，野生型マウスを，また，トランスジェニックマウス（Tg）であれば，Tg と non-Tg とを判別します。ジェノタイピングの方法については，遺伝子改変マウスの開発当初は，サザンブロッティング法が用いられてきましたが，現在では，それは，作製の初期段階での使用に限られ，系統のライン化後の世代からは，ほとんど PCR 法が用られています。PCR 法についても，当初は，マウス尻尾の抽出物を Proteinase K 処理後，DNA を精製してから PCR という手順が一般的でした。 しかし，冒頭に記しましたように，遺伝子改変マウスを用いた研究は一般化したことで，ジェノタイピング自体はルーチン化し，時間面，コスト面からも効率化が求められ，最近では，効率化を目指した方法として，未精製 DNA を直接 PCRする方法が広まってきています。

2016.09.26