消毒薬（クロルヘキシジン，ベンゼトニウム，ベンザルコニウム）の分析例について（HPLC）

	「消毒薬の分析例についてその2（HPLC）」
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	インフルエンザの感染対策にエタノールと組み合わせて手指消毒薬として使用されたり，創傷部位の殺菌・消毒薬として使用されるクロルヘキシジン，ベンゼトニウム，ベンザルコニウムの高速液体クロマトグラフ（HPLC）を用いた分析を紹介します。

クロルヘキシジン

塩化ベンゼトニウム

1.クロルヘキシジン，ベンゼトニウム

　医薬用殺菌薬であるクロルヘキシジンは，衛生試験法（注解2005）においてドデシルスルホン酸ナトリウムをイオンペアとして用いる逆相イオンペアHPLC 法が試験法として採用されています。
　本試験法に準拠した分析方法で，クロルヘキシジン酢酸塩と陽イオン界面活性剤の一種で殺菌作用を有する塩化ベンザルコニウムを一斉分析した例を示します。　図1は標準品（二酢酸クロルヘキシジンと塩化ベンゼトニウム；10μL 注入）のクロマトグラム，図2は市販消毒剤（消毒剤A 20倍希釈，B とC 10倍希釈；各々10μL 注入）のクロマトグラムです。　クロルヘキシジン，ベンゼトニウムの2成分は，極大吸収波長が異なるため，クロマトグラムの途中で波長切り換えを行っています。

図1 標準品のクロマトグラム

図2 市販消毒剤のクロマトグラム

　Table.1 分析条件

カラム	： Phenomenex Gemini-NX 5μC18（150mmLx4.6 mm I.D.）
移動相	： 2g/Lドデシルスルホン酸ナトリウム，6mL/L酢酸を含む水/アセトニトリル/THF = 4/4/2 (v/v/v）
流量	： 1.0 mL/min
温度	： 40℃
検出器	： UV検出器 258 nm （0～10分），272 nm （10分以降）

塩化ベンザルニウム

2.ベンザルコニウム

　塩化ベンザルコニウムは，陽イオン界面活性剤の一種で，一般には塩化アルキルジメチルベンジルアンモニウムの混合物であり，そのアルキル鎖はC8～C18にわたると言われています。　 HPLC法で塩化ベンザルコニウムを分析する場合，陽イオン交換クロマトグラフィーを用いて分離する方法と逆相クロマトグラフィーを用いて分離する方法が考えられます。　塩化ベンザルコニウム(C14)標準品は1000 mg/L，市販消毒剤D,E （100 倍希釈）を各々10μL 注入して分析しました。　図3に陽イオン交換条件での分析例を，図4に逆相条件での分析例を示します。　陽イオン交換条件では，塩化ベンザルコニウムのアルキル鎖が長いものほど早く溶出しました。　一方，通常のC18カラムを用いた逆相条件（この場合，逆相イオンペアクロマトグラフィー）では，アルキル鎖が短いものから順に溶出しています。

図3 陽イオン交換条件でのクロマトグラム

　Table.2 分析条件

カラム	：Phenomenex Luna 5μ SCX 　（250 mmLx4.6 mm I.D.）
移動相	：20 mmolL/L過塩素酸ナトリウムを含む　水/アセトニトリル = 6/4 （v/v）
流量	： 1.0 mL/min
温度	： 45℃
検出器	： UV検出器 265 nm

図4 逆相条件でのクロマトグラム

　Table.3 分析条件

カラム	：Phenomenex Luna 5μ C18 　（150 mmLx4.6 mm I.D.）
移動相	：20 mmolL/L過塩素酸ナトリウムを含む　水/アセトニトリル = 2/8 （v/v）
流量	： 1.0 mL/min
温度	： 45℃
検出器	： UV検出器 265nm

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